Цели обучения: научить определять общий белок в сыворотке крови биуретовым методом и интерпретировать полученные результаты.
Задачи обучения:
1.знать принцип метода определения общего белка в сыворотке крови биуретовым методом;
2.уметь составлять алгоритм проведения анализа;
3.уметь определять общий белок в сыворотке крови;
4.знать диагностическую ценность данного анализа;
5.уметь интерпретировать полученные результаты.
Основные вопросы темы:
1.Роль белков в крови.
2.Норма уровня белка в сыворотке крови.
3.Гипер- и гипопротеинемии, причины их возникновения.
4.Качественные реакции на белки.
5.Принцип метода определения общего белка в сыворотке крови.
6.Диагностическое значение определения общего белка в сыворотке крови.
Методы обучения – лабораторная работа.
Принцип метода определения общего белка в сыворотке крови – белки и пептиды образуют с ионами меди в щелочной среде комплекс сине-фиолетового цвета, интенсивность которого прямо пропорциональна концентрации общего белка в образце и измеряется фотометрически.
Для работы используются наборы «Биотест» для определения общего белка фирмы PLIVA-Lachema Diagnostika.
Для анализа используется негемолизированная сыворотка крови или плазма (гепарин, ЭДТА).
Проведение анализа:
| контроль | образец | стандарт | |
| Реагент 1 | 1,0 мл | 1,0 мл | 1,0 мл |
| Дистил. вода | 0,02 мл | – | – |
| Образец | – | 0,02 мл | – |
| Калибратор | – | – | 0,02 мл |
Взять три пробирки, приготовить по приведенной схеме исследуемые растворы, затем их смешать, инкубировать 30 мин при температуре 37оС, предохраняя от действия прямого света. Затем измерить оптическую плотность образца (А1), стандарта (А2), относительно контроля в течение 30 мин при длине волны 520-560 нм в кюветах на 1см.
Расчет: общий белок в сыворотке крови (г/л)=А1/А2 х Сст, где Сст – концентрация раствора стандарта.
Нормальные величины общего белка в сыворотке крови (г/л):
новорожденные 52-91;
дети до 3 лет 54-87;
дети и взрослые 64-85.
Определению может мешать большое количество декстранов в сыворотке крови и плазме (например, после внутривенного вливания полидекстранов).
Диагностическое значение определения общего белка в сыворотке крови. Различают нормо-, гипер- и гипопротеинемию. Изменения уровня общего белка могут быть абсолютными и или относительными.
Нагрузка водой приводит к относительной гипопротеинемии, дегидратация (обезвоживание) – к относительной гиперпротеинемии.
Абсолютная гипопротеинемия выявляется при снижении биосинтеза, усилении катаболизма, аномальных потерях. В первую очередь происходит снижение альбумина, что обусловлено:
1-недостаточным поступлением белка с пищей;
2-подавлением протеосинтетической функции печени;
3-повышенным распадом белка в организме;
4-потерей белка организмом при острых и хронических кровотечениях, с мочой при нефротическом синдроме;
5-перемещение в другие ткани при резко увеличенной проницаемости капиллярной стенки;
6-наследственные гипопротеинемии (анальбуминемия, агаммаглобулинемия и т.д.).
Абсолютная гиперпротеинемия – встречается редко, обычно при увеличении синтеза глобулинов, при миеломной болезни, макроглобулинемии Вальденстрема.
Результаты занести в тетради, сравнить с нормальными показателями, сделать выводы.
Литература:
1.Тапбергенов С.О. Медицинская биохимия.- Астана, 2001,с.214.
2.Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия.- М.,2005,с.438.
3.Биохимия, под ред. Чл.-корр. РАН, проф. Е.С. Северина.- М.,2005,с.16, 682.
- Николаев А.Я. Биологическая химия.- М.,2004, с.59, 504.
5.Камышников В.С. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике.- Минск, 2000, т.1,с.200.
Контрольные вопросы:
Как проводится биуретовая реакция?
Какова роль белков в сыворотке крови?
В чем причины гиперпротеинемии?
Каковы нормальные показатели уровня белков в крови?
Принцип метода определения общего белка в сыворотке крови?
В чем причины гипопротеинемии?
Диагностическое значение определения общего белка в крови?
