Методы обучения – лабораторная работа.
Принцип метода определения общих липидов в сыворотке крови –ненасыщенные жирные кислоты и липиды, фосфолипиды и холестерин после гидролиза серной кислотой взаимодействуют с фосфорнованилиновым реактивом, образуя красное окрашивание. Интенсивность красного окрашивания прямо пропорциональна концентрации общих липидов в образце и измеряется фотометрически.
Для работы используются наборы «Биотест» для определения общих липидов фирмы PLIVA-Lachema Diagnostika.
Для анализа используется гидролизат сыворотки крови, приготовленный заранее.
Проведение анализа:
| контроль | образец | стандарт | |
| гидролизат | 0,10 мл | 0,10 мл | 1,0 мл |
| реактив 2 | 1,50 мл | 1,50 мл | 1,50 мл |
Взять три пробирки, приготовить по приведенной схеме исследуемые растворы, затем их смешать, инкубировать 50 мин при температуре 15-25оС , предохраняя от действия прямого света. Затем измерить оптическую плотность образца (А1), стандарта (А2), против контрольного раствора при длине волны 510-550 нм в кюветах на 1см. Стабильность окраски 1час.
Расчет: общие липиды в сыворотке крови (г/л)=А1/А2 х Сст, где Сст – концентрация раствора стандарта.
Нормальные величины общих липидов в сыворотке крови (г/л): 4,0-8,0
Принцип ферментативного определения общего холестерина в сыворотке крови – эфиры холестерина холестеразой гидролизуются до свободного холестерина, который окисляется холестеролоксидазой с образованием перекиси водорода. Образующаяся перекись водорода при катализе пероксидазой реагирует с фенолом и 4-аминоантипирином, образуя окрашенный хинонимин. Интенсивность розово-красного окрашивания прямо пропорциональна концентрации холестерина в образце и измеряется фотометрически.
Для работы используются наборы «Биотест» для определения общего холестерина фирмы PLIVA-Lachema Diagnostika.
Для анализа используется негемолизированная сыворотка крови или плазма (гепарин, ЭДТА).
Проведение анализа:
| контроль | образец | стандарт | |
| Реагент R1 | 1,0 мл | 1,0 мл | 1,0 мл |
| Дистил.вода | 0,01 мл | – | – |
| Образец | – | 0,01 мл | – |
| Стандарт | – | – | 0,01 мл |
Взять три пробирки, приготовить по приведенной схеме исследуемые растворы, перемешать, инкубировать 10 мин при температуре 37оС или 20 мин при 20-25оС, предохраняя от действия прямого света. Затем измерить оптическую плотность образца (А1), стандарта (А2), относительно контроля при длине волны 500(546) нм в кюветах на 1см. Стабильность окраски 1час.
Расчет: общий холестерин в сыворотке крови (ммоль/л)=А1/А2 х Сст, где Сст – концентрация раствора стандарта.
Нормальные величины холестерина в сыворотке крови (ммоль/л):
Сыворотка, плазма до 5
Клинические показатели риска:
риск 5,0-6,2
высокий риск более 6,2
Диагностическое значение определения общих липидов в сыворотке крови.
Гиперлипемия – увеличение концентрации общих липидов плазмы может наблюдаться через 1 – 4 часа после приема пищи. Гиперлипемия наблюдается при сахарном диабете (10,0-20,0 г/л), нефротическом синдроме (10,0-50,0 г/л), биллиарном циррозе печени, остром гепатите, остром или хроническом нефрите. Содержание общих липидов увеличивается при эссенциальной (семейной) гиперлипемии, ожирении, атеросклерозе, ишемической болезни сердца, гипотиреозе, панкреатите, злоупотреблении алкоголем.
Содержание общего холестерола повышается при атерогенных типах гиперлипопротеинемий Па, Пб, III, ишемической болезни сердца, инфаркте миокарда. Наиболее высокий уровень холестерола отмечается при генетических нарушениях в обмене липопротеидов. Вторичная гиперхолестеролемия наблюдается при заболеваниях печени, поражениях почек, злокачественных опухолях поджелудочной железы и простаты, подагре, эндокринных рассройствах, ожирении, авитаминозе В.
Результаты занести в тетради, сравнить с нормальными показателями, сделать выводы.
Контрольные вопросы:
Принцип метода определения общих липидов, β-липопротеидов и холестерина в сыворотке крови.
Какова роль общих липидов, β-липопротеидов и холестерина в сыворотке крови?
В чем причины гиперлипемии?
Каковы нормальные показатели уровня общих липидов, β-липопротеидов и холестерина в сыворотке крови?
В чем причины гиперхолестеролемии?
Диагностическое значение определения общих липидов, β-липопротеидов и холестерина в сыворотке крови.
Какие липопротеины являются атерогенными?
Какие липопротеины являются антиатерогенными?
