Количественное определение глюкозы в сыворотке крови

Цели занятия: научить определять глюкозу в сыворотке крови глюкозооксидазным методом и интерпретировать полученные результаты.

 

Задачи обучения:

1.знать принцип метода определения глюкозы в сыворотке крови глюкозооксидазным методом;

2.уметь составлять алгоритм проведения анализа;

3.уметь определять глюкозу в сыворотке крови;

4.знать диагностическую ценность данного анализа;

5.уметь интерпретировать полученные результаты.

6.объяснять механизмы гормональной регуляции обмена углеводов.

7.научиться объяснять изменения уровня глюкозы в зависимости от ритма питания, энергетического и гормонального статуса организма.

 

Основные вопросы темы:

1.Роль глюкозы в крови. Норма уровня глюкозы в сыворотке крови.

2.Гормональная регуляция углеводного обмена. Роль инсулина, глюкагона, глюкокортикоидов.

  1. Нарушения гормональной регуляции уровня глюкозы в крови. Сахарный диабет.

4.Гипер- и гипогликемии, причины их возникновения.

6.Принцип метода определения глюкозы в сыворотке крови.

7.Диагностическое значение определения глюкозы в сыворотке крови.

 

Методы обучения – дискуссия и лабораторная работа.

          Наиболее важны гормоны-антагонисты инсулин и глюкагон, участвующие в регуляции уровня глюкозы в крови.

Инсулин – гормон анаболического действия: увеличивает скорость синтеза липидов, белков, гликогена, понижает уровень глюкозы в крови.

Молекулярная масса инсулина, состоящего из двух полипептидных цепей, соединенных двумя дисульфидными мостиками составляет 5700 Д.

Предшественником инсулина является препроинсулин, образующийся в эндоплазматическом ретикулуме. В пластинчатом комплексе от препроинсулина отщепляется пептид и образуется проинсулин, который представляет собой одну цепь из субъединиц А и В, соединенных между собой С-пептидом. Затем от проинсулина отщепляется С-пептид и высвобождается инсулин, который легко полимеризуется с участием цинка

(цинк-инсулин) и сосредотачивается в гранулах.

В сердце, скелетных мышцах и жировой ткани инсулин стимулирует переносчик глюкозы в плазматической мембране, а в печени активирует гексокиназу и глюкокиназу, что также ускоряет проникновение глюкозы в клетку.

Одновременно инсулин подавляет синтез ключевых ферментов глюконеогенеза (фосфоенолпируваткарбоксикиназы и фруктозо-1,6-дифосфатазы), снижает уровень цАМФ в печени, уменьшая тем самым активность фосфорилазы гликогена и триглицеридлипазы, но стимулируя гликогенсинтетазу и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназу, продуцирующую НАДФН2, необходимую для синтеза жирных кислот и глицеролфосфата. В результате в печени начинается активный синтез гликогена и триацилглицеридов.

Глюкагон стимулирует гликогенолиз и липолиз, быстро мобилизуя источники энергии (глюкозу и жирные кислоты). Глюкагон – гормон катаболического действия, повышает концентрацию глюкозы и кетоновых тел в крови.

          При недостаточной секреции инсулина или его неадекватном действии на клетки-мишени развивается сахарный диабет. ВОЗ определила сахарный диабет как синдром хронической гипергликемии, развивающийся вследствие абсолютного или относительного дефицита инсулина и проявляющийся глюкозурией, полиурией, полидипсией, нарушениями липидного, белкового и минерального обменов и развитием характерных осложнений (острых и хронических).

Различают два типа сахарного диабета: инсулинзависимый (ИЗСД, I типа) и инсулиннезависимый (ИНСД, II типа). Причины ИЗСД: вирусное поражение поджелудочной железы, образование ауто-антител к инсулину или генетический дефект системы синтеза этого гормона. Диабет II типа чаще развивается у тучных людей. Причина ИНСД – не низкий уровень инсулина в крови, а сниженная экспрессия рецепторов инсулина в клетках-мишенях или нарушения в системе проведения сигнала от рецептора инсулина к переносчику глюкозы в клеточной мембране. Больные ИНСД составляют 80-90% всех больных сахарным диабетом.

Гиперинсулинемия  развивается при опухолях поджелудочной железы, ИНСД, панкреатитах, и ожирении, болезни Кушинга, тиреотоксикозе и акромегалии, а также при язвенной болезни двенадцатиперстной кишки.

Принцип метода определения глюкозы в сыворотке крови – глюкоза в присутствии глюкозооксидазы окисляется до глюконовой кислоты и перекиси водорода. Образующаяся перекись водорода при катализе пероксидазой реагирует с фенолом и 4-аминоантипирином, образуя окрашенный хинонимин. Интенсивность розово-красного окрашивания прямо пропорциональна концентрации глюкозы в образце и измеряется фотометрически.

Для работы используются наборы «Биотест» для определения глюкозы фирмы PLIVA-Lachema Diagnostika.

Для анализа используется негемолизированная сыворотка крови или плазма (гепарин, ЭДТА).

 

Проведение анализа:

 

контрольобразецстандарт
Реагент R11,0 мл1,0 мл1,0 мл
Дистил.вода0,02 мл
Образец0,02 мл
Стандарт0,02 мл

Взять три пробирки, приготовить по приведенной схеме исследуемые растворы, затем их смешать, инкубировать 10 мин при температуре 37оС или 20 мин при 20-25оС, предохраняя от действия прямого света. Затем измерить оптическую плотность образца (А1), стандарта (А2), относительно контроля при длине волны 500(546) нм в кюветах на 1см. Стабильность окраски 1час.

Расчет: глюкоза в сыворотке крови (ммоль/л)=А1х Сст, где Сст – концентрация раствора стандарта.

Нормальные величины глюкозы в сыворотке крови (ммоль/л):

Дети:                     от рождения до 1 месяца                   1,7-4,4

2 месяца-15 лет                                   3,3-5,8

Взрослые: сыворотка, плазма                                          4,2-6,0

Капиллярная кровь                                                           3,9-5,6

Диагностическое значение определения глюкозы в крови. Уровень глюкозы в крови здоровых людей поддерживается в относительно постоянных пределах благодаря нейрогуморальной регуляции.

Распад глюкозы в клетках обеспечивает до 50-52% необходимой энергии. Больше всего потребляют глюкозу из крови ЦНС, кишечник и мышцы. Около 36% глюкозы задерживается в печени, 3-5% переводится в гликоген, около 30% – в жир.

Гипергликемия наблюдается при сахарном диабете, усиленном распаде гликогена, снижении синтеза гликогена, повышении глюконеогенеза, снижении утилизации глюкозы тканями под влиянием антагонистов инсулина: соматотропина, глюкагона, кортикотропина, глюкокортикоидов, тироксина, тиротропина. Уровень глюкозы в крови повышается также при некоторых заболеваниях печени: циррозе, гемохроматозе.

Гипогликемия чаще всего связана с абсолютным или относительным повышением уровня инсулина в крови.

Результаты занести в тетради, сравнить с нормальными показателями, сделать выводы.

Литература:

1.Тапбергенов С.О.  Медицинская биохимия.- Астана, 2001,с.214.

2.Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия.- М.,2005,с.438.

3.Биохимия, под ред. Чл.-корр. РАН, проф. Е.С. Северина.- М.,2005,с.16, 682.

  1. Николаев А.Я. Биологическая химия.- М.,2004, с.59, 504.

5.Камышников В.С. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике.- Минск, 2000, т.2,с.33-42.

Контроль:

  1. В каких случаях возникает гипергликемия?
  2. В чем причина гипогликемии?
  3. Укажите отличия сахарного диабета от стероидного.
  4. Какие гормоны повышают уровень глюкозы в крови?
  5. Как влияет инсулин на уровень глюкозы в крови?

6.Принцип метода определения глюкозы в сыворотке крови глюкозооксидазным методом?

7.Какова роль глюкозы в сыворотке крови?

8.В чем причины гипергликемии при сахарном диабете?

9.Каковы нормальные показатели уровня глюкозы в крови?

10Диагностическое значение определения глюкозы в крови?

Қажетті материалды таппадың ба? Онда KazMedic авторларына тапсырыс бер

Количественное определение глюкозы в сыворотке крови

error: Материал көшіруге болмайды!