Цель: научить определять общий билирубин в сыворотке крови и интерпретировать полученные результаты.
Задачи обучения:
1.знать принцип метода определения билирубина в сыворотке крови;
2.уметь составлять алгоритм проведения анализа;
3.уметь определять билирубин в сыворотке крови;
4.знать диагностическую ценность данного анализа;
5.уметь интерпретировать полученные результаты.
Основные вопросы темы:
1.Схема образования билирубина.
2.Норма уровня билирубина в сыворотке крови.
3.Прямой и непрямой билирубин,
4.Схема метаболизма билирубина.
5.Принцип метода определения билирубина в сыворотке крови.
6.Диагностическое значение определения билирубина в сыворотке крови.
Методы обучения – лабораторная работа.
Принцип метода определения билирубина в сыворотке крови – билирубин вступает в реакцию азосочетания с диазотированной сульфаниловой кислотой с образованием раствора азокрасителя. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации билирубина в образце и измеряется фотометрически.
Для анализа используется негемолизированная сыворотка крови или плазма (гепарин, ЭДТА).
Проведение анализа на определение общего билирубина:
| Отмерить (мл) | Контроль 1 | Контроль 2 | Проба |
| Реактив 1 | 0,20 | 0,20 | 0,20 |
| Реактив 4 | 0,05 | – | 0,05 |
| Реактив 3 | 1,00 | 1,00 | 1,00 |
| Физ. раствор | 0,20 | 0,05 | – |
| Сыворотка крови | – | 0,20 | 0,20 |
Взять три пробирки, приготовить по приведенной схеме исследуемые растворы, перемешатть, через 10-50 мин добавить во все три пробирки по 1,0 мл реактива 2, перемешать и через 5-60 мин измерить оптическую плотность пробы (А1),контроля 2 (А2), относительно контроля 1 при длине волны 580-620 нм в кюветах на 1см. Анализ проводят при комнатной температуре. Расчет: билирубин в сыворотке крови (мкмоль/л) определяют по калибровочному графику.Для расчета берут разность оптических плотностей пробы и контрольного раствора 2 (А1_-А2).
Нормальные величины билирубина в сыворотке крови (мкмоль/л):
Общий билирубин до 20,5
Прямой билирубин до5,1
Диагностическое определение билирубина в сыворотке крови.
Важный субъективный признак нарушения пигментного обмена – желтуха, которая проявляется обычно при уровне билирубина в крови 27 – 34 мкмоль/л. Причины гипербилирубинемии:
1-усиление гемолиза эритроцитов;
2-нарушение функции гепатоцитов;
3-задержка оттока желчи.
Легкая форма желтухи – уровень билирубина в крови не выше 85 мкмоль/л;
Среднетяжелая – 86 – 169 мкмоль/л; тяжелая свыше – 170 мкмоль/л.
При паренхиматозной (печеночной) желтухе в крови преобладают моноглюкурониды билирубина. Повышается в крови связанный билирубин, что приводит к его появлению в моче. Повышен и неконьюгированный билирубин. При обтурационной (подпеченочной) желтухе в крови резко увеличивается коньюгированный билирубин. При гемолитической (надпеченочной) желтухе в крови повышается неконьюгированный билирубин.
Результаты занести в тетради, сравнить с нормальными показателями, сделать выводы.
Литература:
1.Тапбергенов С.О. Медицинская биохимия.- Астана, 2001,с.228.
2.Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия.- М.,2005,с.434.
3.Биохимия, под ред. Чл.-корр. РАН, проф. Е.С. Северина.- М.,2005,с.16, 646.
- Николаев А.Я. Биологическая химия.- М.,2004, с.462.
5.Камышников В.С. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике.-Минск, 2000, т.2,с.230.
Контрольные вопросы:
Принцип метода определения билирубина в сыворотке крови.
Пути образования билирубина.
Как происходит образование прямого билирубина?
